Particules Lentivirales d'Activation (h) DOCK 7: sc-404461-LAC

DOCK7 code un membre de la famille DOCK, un groupe de facteurs d’échange de nucléotides guanyliques atypiques qui activent préférentiellement Rac1 et Cdc42 afin de réguler le remodelage du cytosquelette d’actine. En contrôlant la formation de replis membranaires (membrane ruffling), la formation de lamellipodes et la polarité cellulaire, DOCK7 influence l’extension des neurites, la migration neuronale ainsi que d’autres processus liés à l’adhésion et à la motilité. L’activité de DOCK7 s’insère dans les réseaux de signalisation des GTPases Rho et dans des voies qui gouvernent le trafic vésiculaire et la dynamique du cytosquelette. Des altérations génétiques de DOCK7 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui confirme son intérêt pour l’étude des mécanismes de différenciation neuronale et d’excitabilité dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales DOCK 7 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de DOCK7 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales DOCK 7 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription DOCK7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de DOCK 7. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif DOCK7 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.