Plasmide CRISPR/Cas9 KO DOC4 (h): sc-406806

Présentation

TENM4 code la protéine transmembranaire teneurine 4 (DOC4), une grande protéine membranaire de type II impliquée dans la communication cellule–cellule, l’adhérence et des signaux de guidage qui influencent l’organisation des tissus et la connectivité neuronale. Par des interactions médiées par ses domaines extracellulaires et ses motifs de signalisation intracellulaires, DOC4 contribue à l’organisation du cytosquelette, à la croissance des neurites et au maintien de la polarité cellulaire. Des modifications de l’expression de TENM4 ou des variations de sa séquence ont été associées à des phénotypes neurologiques et ont également été rapportées dans des études sur le comportement des cellules tumorales, ce qui étaye sa pertinence dans les programmes de migration et d’invasion. Ces propriétés font de TENM4 une cible utile pour disséquer les voies reliant la signalisation dépendante de l’adhérence au développement et au remodelage cellulaire associé aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DOC4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TENM4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TENM4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TENM4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DOC4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TENM4 pour l'étude de la signalisation de DOC4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TENM4 essentiels à la fonction de DOC4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TENM4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DOC4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DOC4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TENM4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DOC4 plasmide HDR (h) et le DOC4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TENM4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TENM4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.