Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) Dnmt2: sc-402709-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Dnmt2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Dnmt2 (h) y el plásmido de doble nickasa Dnmt2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TRDMT1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Dnmt2 Anticuerpo (D-9): sc-365001
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Dnmt2 | sc-402709-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Dnmt2 | sc-402709-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRDMT1 codifica Dnmt2, una metiltransferasa de citosina-5 de ARN evolutivamente conservada que modifica principalmente ARNt específicos (p. ej., m5C en el ARNt Asp-GTC) en lugar del ADN genómico. Esta actividad contribuye a la estabilidad del ARNt, la fidelidad de la traducción y la adaptación celular al estrés, vinculando a TRDMT1 con la regulación epigenética del ARN y la proteostasis. La metilación de ARNt mediada por Dnmt2 se ha asociado con el control de la biogénesis de pequeños ARN y con vías de respuesta al estrés que influyen en la supervivencia y la diferenciación celular. Se han descrito alteraciones en la función o la expresión de TRDMT1 en múltiples contextos de cáncer y en modelos de desregulación del neurodesarrollo y del metabolismo, lo que impulsa estudios mecanísticos sobre la metilación del ARN en fenotipos relevantes para enfermedades.
Dnmt2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TRDMT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TRDMT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TRDMT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TRDMT1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.