Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dnmt2 (m): sc-420034

Présentation

Trdmt1 code Dnmt2, une méthyltransférase ARN cytosine-5 hautement conservée qui modifie principalement les ARNt (notamment la m5C sur la cytosine 38), influençant la stabilité des ARNt, la fidélité du décodage et les réponses cellulaires au stress. En régulant la méthylation des ARN, Dnmt2 contribue au contrôle de la traduction et à des réseaux épitranscriptomiques plus larges, en interaction avec les voies de maturation des ARN et de maintenance du génome. Une activité altérée de TRDMT1/DNMT2 a été associée à une perturbation de la protéostasie et de l’adaptation au stress, avec une pertinence rapportée pour des phénotypes oncogéniques et des processus neurobiologiques dans des systèmes modèles. Chez la souris, Trdmt1 est fréquemment étudié pour son rôle dans la régulation de l’expression génique médiée par l’ARN, l’homéostasie cellulaire et des réponses dépendantes du contexte aux stress environnementaux et métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dnmt2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trdmt1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trdmt1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trdmt1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dnmt2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trdmt1 pour l'étude de la signalisation de Dnmt2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Trdmt1 essentiels à la fonction de Dnmt2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trdmt1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dnmt2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Dnmt2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trdmt1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dnmt2 plasmide HDR (m) et le Dnmt2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trdmt1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trdmt1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.