Dnmt1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420033-LAC

O gene Dnmt1 de camundongo codifica a DNA metiltransferase 1 (DNMT1), a principal metiltransferase de manutenção, que copia os padrões de metilação em CpG para o DNA recém-sintetizado durante a fase S, a fim de preservar a memória epigenética após a replicação. A DNMT1 atua em coordenação com UHRF1, PCNA e fatores associados à cromatina para acoplar a manutenção da metilação do DNA à replicação do DNA, ao remodelamento da cromatina, à repressão transcricional e à estabilidade do genoma. Por meio da regulação da metilação de promotores e de elementos repetitivos, a DNMT1 influencia o comprometimento de linhagem, o imprinting, a inativação do cromossomo X e a supressão de elementos transponíveis. A atividade ou a expressão desregulada de DNMT1 está associada a paisagens aberrantes de metilação do DNA observadas na biologia do câncer, em defeitos do desenvolvimento e em modelos de instabilidade epigenética, apoiando seu uso em estudos de regulação gênica e transições de estados de cromatina.

As Partículas de Ativação Lentivirais Dnmt1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Dnmt1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Dnmt1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Dnmt1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Dnmt1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Dnmt1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.