Partículas Lentivirales de Activación (m) Dnmt1: sc-420033-LAC

Mouse Dnmt1 codifica la metiltransferasa de ADN 1 (DNMT1), la principal metiltransferasa de mantenimiento que copia los patrones de metilación de CpG en el ADN naciente durante la fase S para preservar la memoria epigenética tras la replicación. DNMT1 se coordina con UHRF1, PCNA y factores asociados a la cromatina para acoplar el mantenimiento de la metilación del ADN con la replicación del ADN, la remodelación de la cromatina, la represión transcripcional y la estabilidad del genoma. Mediante la regulación de la metilación de promotores y de elementos repetitivos, DNMT1 influye en el compromiso de linaje, la impronta genómica, la inactivación del cromosoma X y la supresión de elementos transponibles. La actividad o expresión desregulada de DNMT1 se asocia con paisajes anómalos de metilación del ADN observados en la biología del cáncer, defectos del desarrollo y modelos de inestabilidad epigenética, lo que respalda su uso en estudios de regulación génica y transiciones del estado de la cromatina.

Las partículas de activación lentiviral Dnmt1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Dnmt1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Dnmt1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Dnmt1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Dnmt1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Dnmt1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.