Plásmido Doble Nickase (m) Dnmt1: sc-420033-NIC

El gen Dnmt1 de ratón codifica la ADN (citosina-5)-metiltransferasa 1, la principal metiltransferasa de mantenimiento que copia los patrones de metilación CpG a la hebra de ADN recién sintetizada durante la fase S. DNMT1 actúa coordinadamente con UHRF1, PCNA y factores asociados a la cromatina para preservar la información epigenética, moldeando programas transcripcionales, la impronta genómica y la inactivación del cromosoma X. Al estabilizar la metilación en elementos repetitivos, DNMT1 contribuye al silenciamiento de transposones y a la integridad del genoma, vinculando su actividad con la replicación del ADN, la organización de la cromatina y las respuestas al daño del ADN. La metilación dependiente de DNMT1 desregulada se asocia ampliamente con estados alterados de expresión génica en el cáncer y con fenotipos epigenéticos y del neurodesarrollo en sistemas modelo, lo que convierte a DNMT1 en un objetivo frecuente para estudios mecanísticos del mantenimiento del epigenoma.

Dnmt1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Dnmt1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Dnmt1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Dnmt1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Dnmt1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.