Plasmide CRISPR/Cas9 KO DnaJB6 (h): sc-404227

Présentation

DNAJB6 code pour DnaJB6, un membre de la famille des co‑chaperons Hsp40/DnaJ qui coopère avec Hsp70 pour réguler le repliement des protéines, leur triage et la protéostasie en conditions basales comme en situation de stress. DnaJB6 participe à la suppression de l’agrégation de protéines mal repliées et contribue à l’organisation du cytosquelette, au contrôle qualité assisté par des chaperons, ainsi qu’à des voies de signalisation sensibles au stress qui influencent l’homéostasie cellulaire. Des altérations de la fonction de DNAJB6 ont été associées à des troubles caractérisés par l’agrégation protéique et une atteinte musculaire, notamment la dystrophie musculaire des ceintures, et sont également étudiées dans le contexte du stress protéotoxique pertinent pour la neurodégénérescence. Ces liens biologiques font de DNAJB6 un nœud utile pour disséquer les voies qui gouvernent l’agrégation, les réseaux de chaperons et la résilience cellulaire face aux protéines mal repliées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DnaJB6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DNAJB6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DNAJB6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DNAJB6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DnaJB6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DNAJB6 pour l'étude de la signalisation de DnaJB6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DNAJB6 essentiels à la fonction de DnaJB6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DNAJB6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DnaJB6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DnaJB6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DNAJB6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DnaJB6 plasmide HDR (h) et le DnaJB6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DNAJB6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DNAJB6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.