Plásmido Doble Nickase (h) DNA pol θ: sc-407414-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DNA pol θ consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DNA pol θ (h) y el plásmido de doble nickasa DNA pol θ (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a POLQ. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DNA pol θ | sc-407414-NIC | 20 µg | $410.00 |
POLQ codifica la polimerasa theta del ADN (Pol θ), una polimerasa de la familia A propensa a cometer errores que también posee actividad similar a helicasa y actúa como mediador central de la unión de extremos mediada por microhomología (MMEJ), también denominada unión de extremos mediada por theta. Pol θ actúa en roturas de doble cadena del ADN y en horquillas de replicación detenidas, promoviendo la unión de extremos mediante microhomologías cortas e influyendo así en la estabilidad del genoma, la tolerancia al estrés replicativo y las firmas mutacionales. Esta vía interactúa con la unión de extremos no homóloga clásica y con la recombinación homóloga, modulando la elección de la vía de reparación en condiciones de resección de extremos del ADN comprometida o de capacidad reducida de recombinación homóloga. La actividad y la expresión alteradas de POLQ se estudian con frecuencia en el contexto de reordenamientos cromosómicos e hipermutagénesis asociados a la biología del cáncer y a estados con defectos en la reparación del ADN.
DNA pol θ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus POLQ en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de POLQ. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de POLQ. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con POLQ alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.