Plásmido Doble Nickase (m) DNA pol ε A: sc-422339-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)DNA pol ε A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DNA pol ε A (m) y el plásmido de doble nickasa DNA pol ε A (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Pole. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DNA pol ε A Anticuerpo (3C5.1): sc-12728
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) DNA pol ε A | sc-422339-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Pole codifica la subunidad catalítica A de la ADN polimerasa épsilon, una polimerasa replicativa de alta fidelidad esencial para la síntesis de ADN de la hebra líder durante la fase S. La subunidad A de la ADN pol ε se coordina con la helicasa CMG y con complejos de factores de replicación para sostener el avance del replisoma, la coordinación del procesamiento de los fragmentos de Okazaki y la duplicación precisa del genoma. Más allá de la replicación, Pole contribuye a la tolerancia al daño en el ADN y a las respuestas al estrés replicativo, interactuando con vías de señalización de puntos de control que preservan la estabilidad de la horquilla de replicación. La alteración de la función de las polimerasas replicativas está estrechamente vinculada a fenotipos de inestabilidad genómica que se utilizan ampliamente para modelar procesos mutacionales y defectos de replicación del ADN relevantes para el cáncer en sistemas experimentales.
DNA pol ε A El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pole en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pole. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pole. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pole alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.