Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) DNA Ligase IV: sc-401372-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DNA Ligase IV correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DNA Ligase IV Double Nickase (h) et le plasmide DNA Ligase IV Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LIG4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DNA Ligase IV Antibody (D-8): sc-271299
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DNA Ligase IV | sc-401372-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DNA Ligase IV | sc-401372-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LIG4 code pour la ligase IV de l’ADN, une ligase ATP‑dépendante qui scelle les extrémités des cassures double brin de l’ADN lors de la jonction d’extrémités non homologues classique (c‑NHEJ). Agissant avec XRCC4, XLF/NHEJ1 et le complexe DNA‑PK, la ligase IV de l’ADN est essentielle à la stabilité du génome, à la recombinaison V(D)J et à la réparation des lésions induites par les rayonnements ionisants. L’altération de LIG4 compromet la fidélité de la réparation des cassures double brin, augmentant les aberrations chromosomiques et la sensibilité au stress génotoxique. Des variants pathogènes sont associés au syndrome LIG4 et à des phénotypes plus larges d’immunodéficience et de radiosensibilité, faisant de cette voie un élément central des études sur la réponse aux dommages de l’ADN et le développement des lymphocytes.
DNA Ligase IV Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LIG4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LIG4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LIG4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LIG4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.