Plásmido CRISPR de Activación (h) DNA Ligase I: sc-402830-ACT

El gen humano **LIG1** codifica la **ligasa de ADN I**, una ligasa dependiente de ATP que sella roturas de una sola hebra y une los fragmentos de Okazaki durante la replicación del ADN de la hebra retardada. Esta enzima es un componente central de la replicación del ADN y de múltiples vías de reparación, incluidas la reparación por escisión de bases y el procesamiento de intermediarios de reparación generados durante el mantenimiento del genoma. Mediante su coordinación con **PCNA**, **FEN1** y otros factores del replisoma y de reparación, la ligasa de ADN I favorece la progresión de la horquilla de replicación y preserva la estabilidad cromosómica. La desregulación de los procesos vinculados a **LIG1** puede contribuir al estrés replicativo y a fenotipos de inestabilidad genómica que se estudian con frecuencia en biología del cáncer y en investigación de la respuesta al daño del ADN.

DNA Ligase I El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LIG1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DNA Ligase I El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LIG1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LIG1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DNA Ligase I. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LIG1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DNA Ligase I en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DNA Ligase I en células tumorales con expresión de LIG1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.