Plásmido CRISPR de Activación (h) DMRT1: sc-402856-ACT

DMRT1 (factor de transcripción 1 relacionado con doublesex y mab-3) codifica un factor de transcripción de unión al ADN con dedos de zinc que desempeña un papel central en el desarrollo gonadal humano y en el mantenimiento del destino de las células germinales masculinas. DMRT1 regula programas transcripcionales que controlan la determinación sexual, la diferenciación de las células de Sertoli y la proliferación y diferenciación de las espermatogonias, integrándose con redes más amplias que incluyen vías reguladas por SOX9 y por el ácido retinoico. Las alteraciones en la dosis o la regulación de DMRT1 se han asociado con trastornos del desarrollo sexual, espermatogénesis deteriorada y disgenesia gonadal, lo que lo convierte en una diana valiosa para estudios mecanísticos de la biología reproductiva. Además, se ha descrito una actividad desregulada de DMRT1 en determinados contextos tumorales, lo que respalda su uso para investigar la especificación de linaje y el control transcripcional en modelos relevantes para enfermedades.

DMRT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DMRT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DMRT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DMRT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DMRT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DMRT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DMRT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DMRT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DMRT1 en células tumorales con expresión de DMRT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.