Dkk-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-420004-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Dkk-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Dkk-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und Dkk-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Dkk1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Dkk-1: sc-374574
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Dkk-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420004-NIC | 20 µg | $410.00 |
Dkk1 kodiert Dickkopf-1 (Dkk-1), einen sezernierten Antagonisten der kanonischen Wnt/β-Catenin-Signalübertragung, der an die Korezeptoren LRP5/6 bindet und die Frizzled-abhängige Aktivierung des Signalwegs moduliert. Durch die Feinabstimmung Wnt-getriebener Transkriptionsprogramme beeinflusst Dkk-1 Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation, Differenzierung und die Gewebemusterbildung während der Entwicklung sowie in der Homöostase des adulten Organismus. In Mausmodellen wurde eine veränderte Dkk1-Aktivität mit fehlregulierter Osteogenese und Knochenremodellierung, beeinträchtigter Geweberegeneration und Veränderungen tumorassoziierter Signalnetzwerke in Verbindung gebracht, vermittelt über Effekte auf das Gleichgewicht der Wnt-Signalwege. Aufgrund seiner extrazellulären Wirkweise ist Dkk-1 zudem ein nützlicher Angriffspunkt zur Untersuchung von Ligand–Rezeptor-Dynamiken und Signalweg-Crosstalk in stammzell- und mikroenvironment-orientierten Systemen.
Dkk-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Dkk1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Dkk1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Dkk1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Dkk1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.