Plásmido Doble Nickase (h) Diversin: sc-405360-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Diversin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Diversin (h) y el plásmido de doble nickasa Diversin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ANKRD6. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Diversin Anticuerpo (G-9): sc-365390
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Diversin | sc-405360-NIC | 20 µg | $410.00 |
ANKRD6 codifica Diversin, una proteína andamiaje con repeticiones de anquirina que coordina la transducción de señales y la organización del citoesqueleto durante el desarrollo y la homeostasis tisular. Diversin modula la señalización Wnt mediante interacciones con componentes centrales de la vía, vinculando las salidas transcripcionales dependientes de β-catenina con la señalización de polaridad celular planar y la actividad posterior de JNK. A través de estas vías, ANKRD6 influye en programas de polaridad celular, migración y diferenciación que dan forma a la morfogénesis. La desregulación del control de la vía Wnt y de la señalización de polaridad se implica con frecuencia en la transformación oncogénica y en defectos congénitos del patrón de desarrollo, lo que convierte a Diversin en un objetivo relevante para estudios mecanísticos del reconfigurado de vías de señalización.
Diversin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ANKRD6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ANKRD6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ANKRD6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ANKRD6 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.