Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (h) DinB: sc-405052-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DinB consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DinB (h) y el plásmido de doble nickasa DinB (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a POLK. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DinB Anticuerpo (A-9): sc-166667
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DinB | sc-405052-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **POLK** codifica la **polimerasa de ADN kappa** (DinB), una polimerasa de síntesis de translesión de la familia Y que permite la replicación a través de aductos voluminosos en el ADN y otras lesiones que, de otro modo, detendrían a la polimerasa replicativa. POLK actúa en la tolerancia al daño del ADN y en el mantenimiento de la progresión de la horquilla de replicación, interactuando con el antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA) y participando en vías coordinadas por la señalización de estrés replicativo mediada por ATR. Su actividad de bypass de lesiones influye en los espectros de mutación y en la estabilidad del genoma, lo que vincula la desregulación de POLK con respuestas celulares alteradas al estrés genotóxico y con una mutagénesis aberrante. Por ello, POLK se estudia en el contexto del equilibrio de las redes de reparación del ADN, la biología del estrés replicativo y los mecanismos que modelan la acumulación de mutaciones somáticas.
DinB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus POLK en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de POLK. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de POLK. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con POLK alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.