Plasmide CRISPR/Cas9 KO DICE1 (m): sc-421932
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- DICE1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique DICE1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DICE1 Antibody (H-6): sc-376524
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO DICE1 (m) | sc-421932 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ints6 code pour DICE1, un composant conservé du complexe Integrator, qui s’associe à l’ARN polymérase II afin de coordonner la maturation de l’extrémité 3′ des petits ARN nucléaires (snRNA) et, plus largement, le contrôle transcriptionnel. Par ses rôles dans la maturation des ARN et la régulation de la transcription, DICE1 influence la progression du cycle cellulaire, la différenciation et des programmes d’expression génique à l’échelle du génome. Une activité altérée d’INTS6/DICE1 a été associée à une perturbation du contrôle de la croissance et à des contextes de signalisation oncogénique, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes de suppression tumorale et du stress transcriptionnel. Dans les systèmes murins, la perturbation d’Ints6 est utile pour disséquer des voies dépendantes d’Integrator qui couplent le traitement des ARN à la chromatine et aux sorties de signalisation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DICE1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ints6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ints6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ints6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DICE1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ints6 pour l'étude de la signalisation de DICE1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ints6 essentiels à la fonction de DICE1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ints6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le DICE1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DICE1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ints6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le DICE1 plasmide HDR (m) et le DICE1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ints6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ints6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.