Dia 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420000-KO-2

Descripción general

Diaph1 (mDia1) codifica la formina Dia 1, un factor de nucleación y elongación de actina que coordina el ensamblaje lineal de F-actina aguas abajo de las GTPasas de la familia Rho, incluida RhoA. Dia 1 favorece procesos de remodelación del citoesqueleto como la polarización celular, la adhesión, la citocinesis y la migración dirigida al vincular señales de señalización con la dinámica de la actina y la estabilización de microtúbulos. A través de estas funciones, Diaph1 se estudia con frecuencia en vías que regulan el tráfico de células inmunitarias, el comportamiento de las barreras vasculares y epiteliales y la mecanotransducción. La actividad alterada de DIAPH1 se ha asociado con fisiopatología relacionada con el citoesqueleto, incluidos fenotipos plaquetarios y hematológicos y pérdida auditiva neurosensorial progresiva, lo que impulsa estudios mecanísticos en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Dia 1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Diaph1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Diaph1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Diaph1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Dia 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Diaph1 para la investigación de la señalización de Dia 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Diaph1 críticos para la función de Dia 1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Diaph1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Dia 1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Dia 1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Diaph1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Dia 1 (m) y el plásmido HDR Dia 1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Diaph1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Diaph1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.