Partículas Lentivirales de Activación (h) DGLUCY: sc-413322-LAC

C14orf159 codifica la proteína humana DGLUCY, un factor mitocondrial predicho implicado en la homeostasis metabólica y en procesos celulares vinculados al estado redox. Aunque la anotación funcional sigue siendo limitada, la evidencia actual respalda un papel en la regulación de vías mitocondriales, con posible influencia sobre el metabolismo energético, el manejo de especies reactivas de oxígeno y las respuestas al estrés celular. La variación en reguladores metabólicos mitocondriales se explora con frecuencia en contextos como la señalización proliferativa, la neurobiología y los fenotipos inflamatorios, lo que convierte a DGLUCY en un objetivo útil para estudios mecanísticos. Investigar la expresión de DGLUCY y las lecturas transcripcionales y metabólicas aguas abajo puede ayudar a aclarar cómo este gen contribuye a la reconfiguración de vías en condiciones fisiológicas y relevantes para la enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral DGLUCY (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de C14orf159 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral DGLUCY (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción C14orf159, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de DGLUCY. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo C14orf159 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.