Plásmido CRISPR de Activación (h) DGAT2: sc-416229-ACT

La DGAT2 humana (diacilglicerol O-aciltransferasa 2) es una enzima asociada al retículo endoplásmico que cataliza el paso final y comprometido de la biosíntesis de triacilglicéridos mediante la acilación del diacilglicerol con acil‑CoA de ácidos grasos. Al controlar la producción de lípidos neutros y la biogénesis de gotículas lipídicas, la DGAT2 conecta la captación de ácidos grasos y la lipogénesis de novo con el almacenamiento energético celular y la homeostasis de los lípidos de membrana. La actividad de DGAT2 se integra con programas metabólicos lipídicos regulados por la señalización de SREBP, el equilibrio de la β‑oxidación y las respuestas al estrés del RE durante el exceso de nutrientes. La expresión desregulada de DGAT2 y la acumulación de triglicéridos se estudian con frecuencia en la disfunción metabólica, incluida la esteatosis hepática y la resistencia a la insulina, así como en la remodelación dependiente de lípidos observada en ciertos cánceres.

DGAT2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DGAT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DGAT2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DGAT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DGAT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DGAT2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DGAT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DGAT2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DGAT2 en células tumorales con expresión de DGAT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.