Plasmide Double Nickase (m) DGAT1: sc-419993-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) DGAT1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DGAT1 Double Nickase (m) et le plasmide DGAT1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Dgat1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) DGAT1 | sc-419993-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) DGAT1 | sc-419993-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Dgat1 code la diacylglycérol O-acyltransférase 1 (DGAT1), une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique (RE) qui catalyse la dernière étape irréversible de la synthèse des triacylglycérols à partir du diacylglycérol et d’acyl-CoA d’acides gras. L’activité de DGAT1 soutient la biogenèse des gouttelettes lipidiques, le stockage des lipides neutres et la régulation du flux des acides gras, ce qui l’inscrit dans le métabolisme des glycérolipides et, plus largement, dans les voies de l’homéostasie énergétique. Dans les tissus métaboliques, DGAT1 contribue à tamponner les intermédiaires lipotoxiques en orientant les acides gras vers les triglycérides, influençant la sensibilité à l’insuline, la signalisation inflammatoire et les réponses au stress cellulaire. Une fonction altérée de DGAT1 est donc pertinente dans des modèles d’obésité, de stéatose hépatique, de dyslipidémie et de défauts de gestion des lipides dans l’intestin, le tissu adipeux et la glande mammaire.
DGAT1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dgat1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dgat1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dgat1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dgat1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.