Plásmido Doble Nickase (h) DGAT1: sc-401735-NIC

DGAT1 codifica la diacilglicerol O-aciltransferasa 1, una enzima asociada al retículo endoplásmico que cataliza el paso final de la síntesis de triacilglicéridos a partir de diacilglicerol y acil‑CoA. Al controlar la formación de lípidos neutros y la biogénesis de gotículas lipídicas, DGAT1 influye en el almacenamiento de energía celular, las respuestas a la lipotoxicidad y la homeostasis de los lípidos de membrana, conectándose con el metabolismo de ácidos grasos y las vías de glicerolípidos. La actividad de DGAT1 es relevante para estudios de regulación metabólica en adipocitos, hepatocitos y epitelio intestinal, donde el manejo de triacilglicéridos determina la absorción de nutrientes y la señalización lipídica. Se ha investigado la expresión o función alterada de DGAT1 en contextos como dislipidemia, resistencia a la insulina, esteatosis hepática e inflamación impulsada por lípidos.

DGAT1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DGAT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DGAT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DGAT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DGAT1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.