Plasmide CRISPR d'Activation (h) DGAT1: sc-401735-ACT

La diacylglycérol O-acyltransférase 1 (DGAT1) est une enzyme localisée dans le réticulum endoplasmique qui catalyse l’étape terminale de la synthèse des triacylglycérols en acylant le diacylglycérol avec un acyl-CoA d’acide gras. Par cette réaction engagée dans la production de lipides neutres, DGAT1 coordonne la biogenèse des gouttelettes lipidiques, la mise en tampon des acides gras et le stockage énergétique cellulaire, à l’interface avec le métabolisme des glycérolipides et les programmes d’adaptation au stress du réticulum endoplasmique. L’activité de DGAT1 influence l’assemblage des lipoprotéines et l’absorption intestinale des lipides, reliant sa régulation à la gestion lipidique systémique. Des altérations de l’expression ou de la fonction de DGAT1 ont été associées à des dérégulations métaboliques et à des phénotypes de stress cellulaire induits par les lipides, pertinents dans des modèles de recherche sur l’obésité, la résistance à l’insuline et la stéatose hépatique.

DGAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DGAT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DGAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DGAT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DGAT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DGAT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DGAT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DGAT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DGAT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DGAT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.