Plásmido CRISPR de Activación (h) DGAT1: sc-401735-ACT

La diacilglicerol O-aciltransferasa 1 (DGAT1) es una enzima localizada en el retículo endoplásmico que cataliza el paso final de la síntesis de triacilglicéridos al acilar el diacilglicerol con acil-CoA de ácidos grasos. Mediante esta reacción comprometida en la producción de lípidos neutros, DGAT1 coordina la biogénesis de las gotas lipídicas, el amortiguamiento de ácidos grasos y el almacenamiento de energía celular, intersectando con el metabolismo de los glicerolípidos y los programas de adaptación al estrés del RE. La actividad de DGAT1 influye en el ensamblaje de lipoproteínas y en la absorción intestinal de lípidos, vinculando su regulación con el manejo lipídico sistémico. La alteración de la expresión o la función de DGAT1 se ha asociado con desregulación metabólica y fenotipos de estrés celular inducidos por lípidos, relevantes para modelos de investigación de obesidad, resistencia a la insulina y esteatosis hepática.

DGAT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DGAT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DGAT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DGAT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DGAT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DGAT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DGAT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DGAT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DGAT1 en células tumorales con expresión de DGAT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.