Dexras1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422604

Descripción general

Rasd1 codifica Dexras1, una pequeña GTPasa relacionada con Ras que funciona como un interruptor de señalización que conecta señales extracelulares con vías intracelulares de segundos mensajeros en células de ratón. Se ha implicado a Dexras1 en la modulación de la señalización de proteínas G heterotriméricas y de respuestas dependientes de AMPc, y participa en programas asociados a la actividad neuronal influenciados por los glucocorticoides y por la señalización relacionada con el óxido nítrico. A través de estas funciones, Rasd1 puede modelar las salidas transcripcionales y la adaptación celular al estrés y a señales hormonales. La desregulación de la señalización Rasd1/Dexras1 se ha estudiado en el contexto de la regulación neuroendocrina y de fenotipos del sistema nervioso, por lo que resulta relevante para investigaciones mecanísticas sobre la regulación génica dependiente de señales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Dexras1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rasd1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rasd1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rasd1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Dexras1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rasd1 para la investigación de la señalización de Dexras1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rasd1 críticos para la función de Dexras1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rasd1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Dexras1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Dexras1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rasd1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Dexras1 (m) y el plásmido HDR Dexras1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rasd1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rasd1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.