Dexras1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422604

Übersicht

Rasd1 kodiert Dexras1, eine kleine Ras-verwandte GTPase, die als Signalschalter fungiert und extrazelluläre Reize mit intrazellulären Second-Messenger-Signalwegen in Mauszellen verknüpft. Dexras1 wird mit der Modulation der Signalübertragung heterotrimerer G-Proteine und cAMP-abhängiger Antworten in Verbindung gebracht und ist an Programmen beteiligt, die mit neuronaler Aktivität assoziiert sind und durch Glukokortikoide sowie NO-bezogene Signalgebung beeinflusst werden. Über diese Funktionen kann Rasd1 transkriptionelle Outputs und die zelluläre Anpassung an Stress- und Hormonsignale mitgestalten. Eine fehlregulierte Rasd1/Dexras1-Signalgebung wurde im Kontext der neuroendokrinen Regulation und von Phänotypen des Nervensystems untersucht, was sie für mechanistische Untersuchungen der signalabhängigen Genregulation relevant macht.

Das Dexras1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rasd1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rasd1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rasd1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Dexras1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rasd1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Dexras1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rasd1-Exone abzielen, die für die Dexras1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rasd1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Dexras1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Dexras1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rasd1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Dexras1 HDR-Plasmid (m) und Dexras1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rasd1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rasd1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.