DET1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406735

Descripción general

DET1 (de-etiolated homolog 1) codifica un regulador nuclear conservado que actúa como andamiaje dentro de la maquinaria de la ligasa E3 de ubiquitina CUL4–DDB1, ayudando a coordinar la degradación de proteínas dependiente de ubiquitina. A través de este complejo, DET1 contribuye al control transcripcional y a procesos asociados a la cromatina que influyen en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la proteostasis. La actividad de DET1 se cruza con programas de señalización regulados por la ubiquitinación, incluidas vías que afectan la expresión génica proliferativa y adaptativa al estrés. La desregulación de la función de la ligasa de ubiquitina vinculada a DET1 se ha relacionado con redes transcripcionales alteradas y fenotipos de estabilidad genómica relevantes para la biología del cáncer y otros trastornos caracterizados por un desequilibrio de la proteostasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DET1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DET1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DET1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DET1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DET1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DET1 para la investigación de la señalización de DET1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DET1 críticos para la función de DET1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DET1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DET1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DET1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DET1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DET1 (h) y el plásmido HDR DET1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DET1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DET1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.