Plásmido CRISPR de Activación (h) Desmin: sc-400248-ACT

El gen humano **DES** codifica la desmina, una proteína de filamentos intermedios de tipo III que forma una red estructural central en células musculares esqueléticas, cardíacas y de músculo liso. Los filamentos de desmina integran las miofibrillas con el sarcolema, las mitocondrias y el núcleo para aportar estabilidad mecánica, transmisión de fuerza y posicionamiento de orgánulos durante la contracción y las respuestas al estrés. Esta arquitectura del citoesqueleto se conecta con la organización del sarcómero, la mecanotransducción y las vías de proteostasis que mantienen la integridad muscular. La expresión desregulada de **DES** o el ensamblaje anómalo de sus filamentos se asocian con miopatías miofibrilares y cardiomiopatías, lo que convierte a la desmina en un objetivo clave para estudiar la degeneración muscular y la remodelación celular inducida por estrés.

Desmin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DES sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Desmin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DES en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DES, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Desmin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DES y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Desmin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Desmin en células tumorales con expresión de DES silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.