Plásmido CRISPR de Activación (h) DEPP: sc-409806-ACT

C10orf10 codifica la proteína decidual inducida por progesterona (DEPP), un factor sensible al estrés que se induce en condiciones de hipoxia y limitación de nutrientes y se ha vinculado con la regulación del estrés oxidativo y de programas asociados a la autofagia. La expresión de DEPP se ha asociado con vías de adaptación celular que se entrecruzan con la señalización metabólica y la homeostasis redox, incluida la modulación de las especies reactivas de oxígeno y la supervivencia en condiciones de bajo oxígeno. Se han descrito niveles alterados de DEPP en distintos contextos que implican remodelación tisular e inflamación, y su desregulación se ha explorado en estudios sobre biología tumoral y mecanismos de enfermedad metabólica. Estas características hacen de DEPP una diana útil para investigar el control transcripcional de la adaptación al estrés y fenotipos posteriores como el flujo autofágico, la función mitocondrial y la viabilidad celular.

DEPP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C10orf10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DEPP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C10orf10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C10orf10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DEPP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C10orf10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DEPP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DEPP en células tumorales con expresión de C10orf10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.