densin-180 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403589-ACT

LRRC7 kodiert Densin-180, ein Gerüstprotein der postsynaptischen Dichte, das an exzitatorischen Synapsen angereichert ist und dort hilft, Proteinkomplexe zu organisieren, die die Architektur dendritischer Dornen und die synaptische Signalübertragung regulieren. Densin-180 assoziiert mit membranständigen und zytoskelettalen Komponenten und integriert Signalwege, die mit synaptischer Plastizität verknüpft sind, einschließlich Interaktionen, die rezeptorassoziierte Maschinerie mit nachgeschalteten Kinasen und dem Aktin-Umbau koppeln. Aufgrund seiner Rolle bei der Aufrechterhaltung der postsynaptischen Organisation und neuronalen Konnektivität wird LRRC7 im Kontext neuroentwicklungsbedingter und neuropsychiatrischer Krankheitsmechanismen untersucht, bei denen Synapsenstruktur und Signalgebung gestört sind. Die experimentelle Modulation der LRRC7-Expression unterstützt mechanistische Analysen der synaptischen Reifung, der aktivitätsabhängigen Signalübertragung und der Netzwerkfunktion in humanen neuronalen Modellen.

densin-180 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LRRC7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

densin-180 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LRRC7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LRRC7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen densin-180-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LRRC7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von densin-180-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des densin-180-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LRRC7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.