Plásmido CRISPR de Activación (h) dendrin: sc-404856-ACT

El DDN humano codifica dendrina, una proteína asociada a la densidad postsináptica, enriquecida en neuronas e implicada en la organización de complejos de señalización sináptica. La dendrina participa en la remodelación dependiente de la actividad de las espinas dendríticas y se ha relacionado con la regulación del citoesqueleto y con interacciones proteína–proteína que modelan la plasticidad sináptica. Más allá del SNC, la dendrina se ha estudiado en los podocitos glomerulares, donde se localiza en compartimentos asociados al diafragma de hendidura y se ha vinculado a vías que influyen en la estructura celular y en las respuestas al estrés. La desregulación de la expresión o la localización de la dendrina se ha investigado en el contexto de fenotipos neuropsiquiátricos y de procesos asociados a lesión renal, lo que respalda su valor como diana de investigación para comprender los mecanismos de la sinapsis y la integridad de la barrera de filtración.

dendrin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DDN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

dendrin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DDN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DDN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de dendrin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DDN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de dendrin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía dendrin en células tumorales con expresión de DDN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.