Delta Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400790

Descripción general

DLL1 codifica el ligando humano Delta-like 1 (Delta), un activador de los receptores Notch anclado a la membrana que media señalización yuxtacrina para controlar decisiones de destino celular, el patrón tisular y el mantenimiento de células madre/progenitoras. La interacción DLL1–NOTCH desencadena la liberación proteolítica del dominio intracelular de Notch y programas transcripcionales a través de RBPJ/CSL que influyen en la diferenciación, la proliferación y la apoptosis. Esta vía se entrecruza con programas del desarrollo y señales del microambiente, y su desregulación se estudia con frecuencia en contextos como la biología tumoral, la neurogénesis y el desarrollo de células inmunitarias. La expresión de DLL1 y la dinámica de su señalización también son relevantes para las transiciones epitelio‑mesénquima y la regulación de la angiogénesis mediante un equilibrio coordinado entre ligandos y receptores de Notch.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Delta (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DLL1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DLL1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DLL1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Delta.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DLL1 para la investigación de la señalización de Delta, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DLL1 críticos para la función de Delta
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DLL1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Delta CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Delta CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DLL1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Delta (h) y el plásmido HDR Delta (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DLL1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DLL1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.