Partículas Lentivirales de Activación (m) Delta-3: sc-420011-LAC

El gen Dll3 de ratón codifica Delta-3, un ligando atípico tipo Delta que modula la señalización de Notch durante el desarrollo embrionario, con funciones destacadas en la somitogénesis, la neurogénesis y programas de diferenciación que dependen de una comunicación célula–célula precisa. A diferencia de los ligandos canónicos activadores, DLL3 suele asociarse al tráfico intracelular y a una supresión o ajuste dependiente del contexto del output de la vía Notch, influyendo en redes transcripcionales HES/HEY y en el compromiso de linaje. La alteración de la actividad de Dll3 perturba la dinámica del reloj de segmentación y el patrón vertebral, lo que lo vincula con fenotipos esqueléticos congénitos y desregulación del desarrollo. Como resultado, Dll3 se estudia con frecuencia para comprender la regulación de la vía Notch, la temporización del desarrollo y los circuitos transcripcionales que gobiernan las decisiones de destino celular.

Las partículas de activación lentiviral Delta-3 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Dll3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Delta-3 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Dll3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Delta-3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Dll3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.