Delta-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420011

Descripción general

Dll3 codifica Delta-3, un ligando atípico de Notch que modula la señalización del receptor Notch durante el desarrollo embrionario, en particular en la somitogénesis y el patrón anteroposterior. En el ratón, DLL3 funciona principalmente en el aparato de Golgi y el retículo endoplásmico para influir en la salida de la vía de Notch al afectar el procesamiento del receptor y las interacciones ligando-receptor, dando forma a programas transcripcionales que regulan decisiones de destino celular. La alteración de Dll3 desorganiza la señalización oscilatoria de Notch y la dinámica del reloj de segmentación, lo que provoca defectos en el patrón de vértebras y costillas y proporciona un modelo para malformaciones congénitas de la columna. Dado que la señalización de Notch también se cruza con la diferenciación, la proliferación y la homeostasis tisular, los estudios de pérdida de función de Dll3 son útiles para analizar la comunicación entre vías en contextos relevantes para el desarrollo y la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Delta-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dll3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dll3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dll3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Delta-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dll3 para la investigación de la señalización de Delta-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Dll3 críticos para la función de Delta-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dll3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Delta-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Delta-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dll3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Delta-3 (m) y el plásmido HDR Delta-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dll3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dll3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.