DEC2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402891-ACT

BHLHE41 kodiert den basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor DEC2, einen nukleären Regulator, der an E-Box-Motive bindet, um zirkadiane transkriptionelle Netzwerke und zelluläre Zustandsprogramme zu modulieren. DEC2 integriert Signale zentraler Uhrkomponenten und koppelt rhythmische Genexpression an Prozesse wie Schlaf-Wach-Timing, metabolische Anpassung und zelluläre Stressantworten, einschließlich hypoxieassoziierter transkriptioneller Umprogrammierung. In immunologischen und epithelialen Kontexten wurde DEC2 mit Differenzierung und inflammatorischer Signalgebung in Verbindung gebracht, indem es transkriptionelle Outputs nachgeschaltet auf Umweltreize prägt. Eine dysregulierte BHLHE41/DEC2-Aktivität wurde in der Literatur mit veränderten Schlafphänotypen sowie mit kontextabhängigen Rollen in der Tumorbiologie und in Modellen metabolischer Erkrankungen assoziiert, was mechanistische Studien zur transkriptionellen Kontrolle unterstützt.

DEC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BHLHE41-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DEC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BHLHE41-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BHLHE41-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DEC2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BHLHE41-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DEC2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DEC2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BHLHE41-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.