Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
DEC-205 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417220
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- DEC-205 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico DEC-205, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DEC-205 Anticuerpo (F-4): sc-515016
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
DEC-205 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-417220 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
LY75 codifica DEC-205 (CD205), un receptor endocítico multilectina de la familia del receptor de manosa que se expresa en altos niveles en células dendríticas y otras células presentadoras de antígeno. DEC-205 favorece la captación de alta eficiencia y el direccionamiento de antígenos proteicos hacia compartimentos endosómicos/lisosómicos, lo que respalda la presentación en MHC de clase II y, en determinadas condiciones, la presentación cruzada para el cebado de células T CD8+. Por su papel en la captura y el procesamiento de antígenos y en la tolerancia inmunitaria frente a la activación, LY75 se utiliza con frecuencia para investigar programas de maduración de las células dendríticas y la polarización de la inmunidad adaptativa. Las alteraciones en la expresión y el tráfico de DEC-205 se han asociado con contextos inflamatorios y autoinmunes, y también se estudian en inmunología tumoral como marcadores y mediadores funcionales de estados de presentación de antígeno.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO DEC-205 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LY75 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LY75 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LY75 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DEC-205.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LY75 para la investigación de la señalización de DEC-205, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de LY75 críticos para la función de DEC-205
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LY75 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido DEC-205 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DEC-205 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LY75. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DEC-205 (h) y el plásmido HDR DEC-205 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LY75 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LY75 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.