Particules Lentivirales d'Activation (h) DDX36: sc-404744-LAC

DHX36 (également connu sous le nom de DDX36) code une hélicase ARN de type DEAH-box, dépendante de l’ATP, qui reconnaît préférentiellement et résout les structures en G-quadruplex dans l’ARN et l’ADN, contribuant ainsi à façonner le métabolisme de l’ARN et le maintien du génome. DDX36 participe à la régulation de la traduction, du renouvellement des ARNm et du remodelage des ribonucléoprotéines, et a été impliqué dans le contrôle de programmes transcriptionnels via des mécanismes dépendants des G4. En modulant le traitement, dépendant de l’hélicase, des acides nucléiques structurés, DDX36 influence des voies liées à la progression du cycle cellulaire, aux réponses au stress et à la signalisation de l’immunité innée. Une activité ou une expression dérégulée de DDX36 a été associée dans la littérature à des états prolifératifs et de différenciation modifiés, et a été explorée dans des contextes pertinents pour le cancer et l’inflammation.

Les particules d'activation lentivirales DDX36 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de DHX36 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales DDX36 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription DHX36, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de DDX36. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif DHX36 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.