Partículas Lentivirales de Activación (h) DDX36: sc-404744-LAC

DHX36 (también conocido como DDX36) codifica una helicasa de ARN tipo DEAH-box dependiente de ATP que reconoce y resuelve de forma preferente estructuras G‑cuádruplex en ARN y ADN, contribuyendo así a la regulación del metabolismo del ARN y al mantenimiento del genoma. DDX36 participa en la regulación de la traducción, el recambio del ARNm y la remodelación de ribonucleoproteínas, y se ha vinculado al control de programas transcripcionales mediante mecanismos dependientes de G4. Al modular el procesamiento dependiente de helicasa de ácidos nucleicos estructurados, DDX36 influye en vías relacionadas con la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la señalización inmunitaria innata. La actividad o expresión desregulada de DDX36 se ha asociado en la literatura con estados proliferativos y de diferenciación alterados, y se ha explorado en contextos relevantes para el cáncer y la inflamación.

Las partículas de activación lentiviral DDX36 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de DHX36 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral DDX36 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción DHX36, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de DDX36. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo DHX36 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.