Plásmido Doble Nickase (h) DDX34: sc-411318-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DDX34 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DDX34 (h) y el plásmido de doble nickasa DDX34 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DHX34. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DDX34 Anticuerpo (E-3): sc-514665
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DDX34 | sc-411318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DDX34 | sc-411318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DHX34 (DDX34) codifica una helicasa de ARN conservada de la familia DEAH-box que participa en el metabolismo posranscripcional del ARN y en la regulación de la vigilancia del ARNm. Se asocia con la degradación del ARNm mediada por codones de terminación prematuros (NMD) y con eventos de procesamiento del ARN que influyen en la estabilidad de los transcritos y en el control de calidad, modulando así los programas de expresión génica durante el crecimiento y la diferenciación celular. La alteración de la actividad de DHX34 puede modificar la homeostasis del ARN y la señalización de respuesta al estrés, lo que la hace relevante para estudiar vías que conectan la vigilancia del ARN con la integridad del genoma y la aptitud celular. Se han descrito cambios en la expresión o la función de DHX34 en estudios moleculares de estados transcripcionales asociados a malignidad, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en redes reguladoras de ARN relevantes para la enfermedad.
DDX34 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DHX34 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DHX34. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DHX34. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DHX34 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.