DDX18 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406057

Descripción general

DDX18 codifica una helicasa de ARN tipo DEAD-box nucleolar que acopla la remodelación del ARN dependiente de ATP a la biogénesis ribosomal y al procesamiento del ARN. DDX18 participa en la maduración del pre-ARNr, el ensamblaje de partículas preribosomales y la coordinación de respuestas de estrés nucleolar que influyen en la progresión del ciclo celular y en la capacidad global de síntesis proteica. La alteración de la función de DDX18 puede desestabilizar el procesamiento del ARNr y la homeostasis de la traducción, vinculando este factor con el control de la proliferación y con programas de mantenimiento del genoma. Se han observado cambios en la expresión o en la dependencia de DDX18 en estudios transcripcionales y funcionales relacionados con el cáncer, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en el metabolismo del ARN asociado al crecimiento.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DDX18 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DDX18 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DDX18 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DDX18 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DDX18.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DDX18 para la investigación de la señalización de DDX18, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DDX18 críticos para la función de DDX18
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DDX18 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DDX18 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DDX18 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DDX18. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DDX18 (h) y el plásmido HDR DDX18 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DDX18 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DDX18 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.