Plásmido Doble Nickase (h) DDX15: sc-403959-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DDX15 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DDX15 (h) y el plásmido de doble nickasa DDX15 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DHX15. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DDX15 Anticuerpo (E-6): sc-271686
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DDX15 | sc-403959-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DDX15 | sc-403959-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DHX15 (DDX15) codifica una helicasa de ARN tipo DEAH-box que remodela complejos ARN–proteína durante el empalme (splicing) del pre-ARNm y otros procesos más amplios de procesamiento de ARN. DDX15 actúa dentro de las vías del espliceosoma para favorecer la eliminación de intrones, la vigilancia del ARN y la maduración de transcritos que regulan el control del ciclo celular y programas de respuesta al estrés. Al influir en la selección de sitios de empalme y en la fidelidad de los transcritos, DHX15 puede afectar la composición del proteoma y las salidas de señalización en diversos contextos celulares. La desregulación de la actividad de helicasas de ARN y de redes de factores de empalme en las que participa DHX15 se ha asociado con estados alterados de expresión génica relevantes para fenotipos proliferativos y del neurodesarrollo, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del metabolismo del ARN.
DDX15 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DHX15 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DHX15. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DHX15. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DHX15 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.