Plasmide Double Nickase (h) DDX1: sc-405137-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DDX1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DDX1 Double Nickase (h) et le plasmide DDX1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DDX1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DDX1 Antibody (A-7): sc-271438
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DDX1 | sc-405137-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DDX1 | sc-405137-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DDX1 (DEAD-box helicase 1) est une hélicase d’ARN humaine dépendante de l’ATP qui remodèle l’ARN et les complexes ribonucléoprotéiques afin de soutenir la maturation, le transport et la traduction des ARN. Elle participe au métabolisme de l’ARN associé à la transcription et contribue au maintien de l’intégrité du génome grâce à des interactions avec les systèmes de réponse aux dommages de l’ADN et de réparation. DDX1 a également été impliquée dans la signalisation de l’immunité innée via la régulation des voies de détection de l’ARN et des granules ribonucléoprotéiques induits par le stress. Une activité ou une expression dérégulée de DDX1 a été associée à une prolifération altérée et à des perturbations de l’homéostasie de l’ARN dans des contextes pertinents pour le cancer, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques sur la fonction des hélicases d’ARN.
DDX1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DDX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DDX1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DDX1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DDX1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.