DDT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418461

Descripción general

DDT (tautomerasa de D-dopacromo), también conocida como MIF-2, es una enzima de tipo citocina que participa en la señalización inmunitaria y en las respuestas al estrés celular, actuando junto con el eje de MIF. Contribuye a la regulación de la producción de mediadores inflamatorios, el reclutamiento de leucocitos y la señalización pro-supervivencia mediante vías que se entrecruzan con las redes MAPK/ERK y NF-κB, dependiendo del contexto celular y del uso de receptores. La expresión de DDT se ha vinculado con la modulación de la actividad inmunitaria innata y adaptativa, con relevancia descrita para la inflamación asociada a tumores, fenotipos autoinmunes y la desregulación metabólica. Como factor soluble con actividad enzimática, DDT ofrece un nodo abordable para desentrañar cómo la señalización de citocinas se integra con programas de redox, proliferación y migración en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DDT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DDT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DDT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DDT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DDT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DDT para la investigación de la señalización de DDT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DDT críticos para la función de DDT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DDT para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DDT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DDT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DDT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DDT (h) y el plásmido HDR DDT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DDT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DDT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.