Plásmido Doble Nickase (h) DDI2: sc-408297-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DDI2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DDI2 (h) y el plásmido de doble nickasa DDI2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DDI2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DDI2 Anticuerpo (A-3): sc-514004
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DDI2 | sc-408297-NIC | 20 µg | $410.00 |
DDI2 (homólogo 2 del gen inducible por daño en el ADN 1) codifica un factor de tipo proteasa aspártica que respalda la proteostasis y la transcripción adaptativa al estrés, en particular al permitir la recuperación del proteasoma mediante el procesamiento del factor de transcripción anclado al RE NFE2L1/NRF1 tras la inhibición del proteasoma. A través de esta vía dependiente de NRF1, DDI2 ayuda a coordinar la expresión de subunidades del proteasoma y de otros genes de control de calidad, vinculando la degradación dependiente de ubiquitina con las respuestas celulares al estrés proteotóxico. La función de DDI2 se entrecruza con la degradación asociada al RE y con señales más amplias de la respuesta a proteínas mal plegadas, influyendo en cómo las células se adaptan a una capacidad reducida de degradación proteica. La desregulación de este eje es relevante para la tolerancia al estrés en células cancerosas y para defectos de proteostasis relacionados con la neurodegeneración, lo que convierte a DDI2 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la homeostasis del proteasoma.
DDI2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DDI2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DDI2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DDI2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DDI2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.