DDI2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427193

Übersicht

Mouse DDI2 (DNA-damage-inducible 1 homolog 2) kodiert eine Aspartylprotease, die an der Qualitätskontrolle von Proteinen und der Signalübertragung in Stressantworten beteiligt ist; es wurden Funktionen bei der Prozessierung und Regulierung transkriptioneller Programme beschrieben, die mit der Proteasomenfunktion verknüpft sind. Die DDI2-Aktivität steht mit der Dynamik des Ubiquitin-Proteasom-Systems und der zellulären Anpassung an proteotoxischen Stress in Zusammenhang und beeinflusst den Abbau fehlgefalteter oder geschädigter Proteine. Über diese Prozesse kann DDI2 Signalwege beeinflussen, die unter Stressbedingungen den Zellzyklus, die Apoptose und die Genomstabilität steuern. Eine Fehlregulation von Proteostase und Stresssignalgebung ist für Mechanismen relevant, die in der Neurodegeneration, Entzündung und Krebsbiologie untersucht werden, wodurch Ddi2 ein nützlicher Genlokus für die Analyse von Signalwegen in Mausmodellen ist.

Das DDI2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ddi2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ddi2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ddi2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DDI2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ddi2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DDI2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ddi2-Exone abzielen, die für die DDI2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ddi2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DDI2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DDI2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ddi2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DDI2 HDR-Plasmid (m) und DDI2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ddi2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ddi2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.