Plásmido Doble Nickase (h) DDC: sc-403811-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DDC consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DDC (h) y el plásmido de doble nickasa DDC (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DDC. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DDC | sc-403811-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DDC | sc-403811-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DDC codifica la descarboxilasa de aminoácidos aromáticos L (AADC), una enzima dependiente de fosfato de piridoxal que cataliza la descarboxilación de L-DOPA a dopamina y de 5-hidroxitriptófano a serotonina. A través de estas reacciones, DDC actúa en un punto de ramificación clave de la biosíntesis de neurotransmisores monoaminérgicos e influye en redes de señalización posteriores que regulan la excitabilidad neuronal, el control motor, las vías relacionadas con el estado de ánimo y la comunicación neuroendocrina. La actividad de DDC se entrecruza con el metabolismo de la tirosina y el triptófano, la homeostasis presináptica de neurotransmisores y el manejo vesicular de monoaminas, vinculando el flujo metabólico con la función sináptica. La desregulación de la expresión de DDC o de su actividad enzimática es relevante para estudios sobre alteraciones de las vías dopaminérgica y serotoninérgica, fenotipos del neurodesarrollo y relacionados con el movimiento, y mecanismos más amplios de acoplamiento entre metabolismo y neurotransmisión.
DDC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DDC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DDC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DDC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DDC alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.