Plásmido Doble Nickase (h) DDB2: sc-401686-NIC

DDB2 codifica un factor de reconocimiento del daño en el ADN que se asocia con DDB1 para formar el complejo UV-DDB, un sensor clave de las fotolesiones inducidas por la radiación UV que inicia la reparación por escisión de nucleótidos del genoma global (GG-NER). Mediante su acoplamiento a la maquinaria de la ligasa E3 de ubiquitina CUL4A–RBX1, DDB2 promueve la verificación de la lesión y la remodelación de la cromatina al ubiquitinar sustratos asociados a la reparación, facilitando así el reclutamiento de componentes posteriores de la NER. La actividad de DDB2 se interrelaciona con el control de los puntos de control del ciclo celular y con las vías de estabilidad genómica, vinculando un reconocimiento defectuoso del daño con un aumento de la carga mutacional. La expresión o función alteradas de DDB2 se han asociado con fenotipos de sensibilidad a la radiación UV y se han estudiado en el contexto de la carcinogénesis y de trastornos relacionados con la reparación del ADN.

DDB2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DDB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DDB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DDB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DDB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.