Plásmido Doble Nickase (h) DD4: sc-403692-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DD4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DD4 (h) y el plásmido de doble nickasa DD4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a AKR1C4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DD4 Anticuerpo (WW3): sc-100526
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DD4 | sc-403692-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DD4 | sc-403692-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKR1C4 codifica una aldo-ceto reductasa (AKR1C4; DD4) que cataliza la reducción de aldehídos y cetosteroides dependiente de NADPH, contribuyendo al metabolismo hepático de las hormonas esteroideas y de los ácidos biliares. DD4 participa en la desintoxicación de fase I al modular la interconversión de metabolitos esteroideos activos e inactivos y al procesar compuestos carbonílicos reactivos generados durante el estrés oxidativo. A través de sus funciones en la reducción de carbonilos y la homeostasis de esteroides, AKR1C4 influye en redes de señalización metabólica vinculadas al manejo de lípidos y a la depuración hepática de xenobióticos. La alteración de la expresión o la actividad de AKR1C4 se ha asociado con perfiles desregulados de metabolitos esteroideos y con fenotipos metabólicos relacionados con el hígado, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del diálogo entre los sistemas endocrino y metabólico.
DD4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AKR1C4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AKR1C4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AKR1C4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AKR1C4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.