Plásmido Doble Nickase (h) Dcun1D1: sc-405179-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Dcun1D1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Dcun1D1 (h) y el plásmido de doble nickasa Dcun1D1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DCUN1D1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Dcun1D1 Anticuerpo (3E1): sc-81835
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Dcun1D1 | sc-405179-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Dcun1D1 | sc-405179-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DCUN1D1 codifica Dcun1D1, un factor accesorio de las ligasas E3 de ubiquitina tipo cullin-RING que promueve la neddilación de las proteínas cullina y, con ello, potencia la proteostasis dependiente de ubiquitina. A través de la regulación de la activación de las cullinas, Dcun1D1 influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y el recambio dependiente de señales de proteínas reguladoras clave. La alteración de la expresión de DCUN1D1 o su amplificación se ha vinculado con programas de crecimiento desregulados y se ha descrito en múltiples contextos tumorales, lo que respalda su uso como nodo molecular para estudiar vías oncogénicas de modificación tipo ubiquitina. La investigación sobre DCUN1D1 ayuda a aclarar cómo la conjugación de NEDD8 interactúa con la ubiquitinación para controlar la estabilidad proteica y la aptitud celular bajo estrés.
Dcun1D1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DCUN1D1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DCUN1D1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DCUN1D1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DCUN1D1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.