DcR2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403389-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DcR2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DcR2 Double-Nickase-Plasmid (h) und DcR2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TNFRSF10D abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DcR2: sc-65310
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DcR2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403389-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DcR2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403389-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFRSF10D kodiert den Decoy-Rezeptor 2 (DcR2), ein Mitglied der TNF-Rezeptor-Superfamilie, das an TRAIL (TNFSF10) bindet, jedoch keine funktionsfähige zytoplasmatische Todesdomäne besitzt und dadurch die extrinsische Apoptose-Signalübertragung an der Zelloberfläche moduliert. Indem DcR2 mit Todesrezeptoren wie DR4 und DR5 um die Ligandenbindung konkurriert, kann es die nachgeschaltete Caspase-Aktivierung, NF-κB-Signalausgaben und Stressantwort-Programme beeinflussen, die Zellschicksalsentscheidungen mitbestimmen. DcR2 wird außerdem mit seneszenzassoziierten Phänotypen und entzündlichen Signalkontexten in Verbindung gebracht, in denen das Gleichgewicht der TRAIL-Signalwege die Gewebehomöostase beeinflusst. Eine veränderte TNFRSF10D-Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Zusammenhängen berichtet, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt zur Untersuchung von Apoptoseresistenz und immunbezogenen Signalnetzwerken unterstützt.
DcR2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TNFRSF10D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TNFRSF10D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TNFRSF10D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TNFRSF10D-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.