DcpS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407308

Descripción general

DCPS codifica la enzima humana de descapado “scavenger” DcpS, una hidrolasa de la tríada de histidinas (HIT) que escinde las estructuras residuales de caperuza generadas durante la degradación del ARNm en dirección 3′→5′, reciclando metabolitos derivados de la caperuza y ayudando a mantener la homeostasis del recambio de ARN. Al hidrolizar dinucleótidos de caperuza como m7GpppN, DcpS complementa los procesos de control de calidad del ARN en el citoplasma y el núcleo, y favorece un acoplamiento eficiente entre la degradación del ARNm y el rescate de nucleótidos. Las alteraciones en la actividad de DCPS pueden perturbar la estabilidad del transcriptoma y la vigilancia del ARN, vinculando esta vía con fenotipos asociados a programas de expresión génica desregulados. En consecuencia, DCPS se estudia con frecuencia en el contexto del metabolismo del ARN, las respuestas transcripcionales adaptativas al estrés y los mecanismos que determinan la cinética de degradación del ARNm.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DcpS (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DCPS en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DCPS junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DCPS tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DcpS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DCPS para la investigación de la señalización de DcpS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DCPS críticos para la función de DcpS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DCPS para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DcpS CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DcpS CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DCPS. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DcpS (h) y el plásmido HDR DcpS (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DCPS para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DCPS definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.