Plásmido Doble Nickase (h) DCAMKL1: sc-402160-NIC

DCLK1 (DCAMKL1) codifica una quinasa de serina/treonina asociada a los microtúbulos que integra la unión a microtúbulos tipo doublecortina con la señalización mediada por su actividad quinasa para regular la dinámica del citoesqueleto, la migración neuronal y el crecimiento de neuritas. En contextos epiteliales, DCLK1 se ha utilizado como marcador de las células tuft y se asocia con programas que gobiernan el destino celular, la motilidad y la señalización adaptativa al estrés. Entre las asociaciones de vías descritas se incluyen la remodelación de microtúbulos, la señalización relacionada con MAPK y la regulación de estados transcripcionales vinculados a la diferenciación. Se ha descrito una expresión desregulada de DCLK1 en múltiples tipos de tumores y en contextos inflamatorios, lo que respalda la investigación de mecanismos de fenotipos tipo célula madre, invasión e interacciones con el microambiente, sin implicar resultados clínicos.

DCAMKL1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DCLK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DCLK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DCLK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DCLK1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.