Partículas Lentivirales de Activación (h) DC-SIGN: sc-401368-LAC

CD209 codifica DC-SIGN (receptor no integrina de tipo lectina C específico de células dendríticas que se une a la molécula de adhesión intercelular-3), un receptor de lectina tipo C expresado de forma destacada en células dendríticas y en poblaciones selectas de macrófagos, que reconoce glicanos ricos en manosa y fucosilados. Mediante la unión a ligandos, DC-SIGN influye en el reconocimiento de patógenos, la captación de antígenos, el tráfico endosomal y la formación de la sinapsis inmunitaria, a la vez que se acopla a programas de señalización que implican la modulación de NF-κB dependiente de Raf-1 y respuestas transcripcionales más amplias de la inmunidad innata. Este receptor participa en la comunicación cruzada con las vías de los receptores tipo Toll y moldea la producción de citocinas, lo que puede sesgar el cebado y la polarización posterior de las células T. La actividad y los patrones de expresión desregulados de DC-SIGN se han relacionado con interacciones huésped–patógeno alteradas y con la remodelación del microambiente inmunitario en modelos de enfermedades infecciosas y en contextos inflamatorios.

Las partículas de activación lentiviral DC-SIGN (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CD209 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral DC-SIGN (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CD209, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de DC-SIGN. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CD209 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.