Plásmido CRISPR de Activación (h) DBH: sc-402441-ACT

La dopamina beta-hidroxilasa (DBH) codifica una monooxigenasa dependiente de cobre que cataliza la conversión de dopamina en norepinefrina, un paso clave en la biosíntesis de catecolaminas en neuronas simpáticas y células cromafines de la médula suprarrenal. La actividad de DBH favorece el metabolismo vesicular de neurotransmisores y se integra con las vías impulsadas por la tirosina hidroxilasa que regulan la señalización adrenérgica, las respuestas neuroendocrinas al estrés y la homeostasis cardiovascular. Las alteraciones en la expresión de DBH o en su función enzimática se han relacionado con una desregulación de los niveles de norepinefrina y se estudian en el contexto de rasgos neuropsiquiátricos y disfunción autonómica. Como lectura molecular del estado catecolaminérgico, DBH se utiliza ampliamente para investigar la identidad del linaje noradrenérgico, la maduración neuronal y la remodelación de neurotransmisores dependiente de estímulos.

DBH El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DBH sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DBH El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DBH en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DBH, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DBH. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DBH y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DBH en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DBH en células tumorales con expresión de DBH silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.